نیو ٹیک کی مکمل طور پر خودکار نیوکلک ایسڈ نکالنے اور پتہ لگانے والی مشین

پانچ طاقت:
● نیوکلک ایسڈ نکالنے اور پیوریفائیڈ سٹیپ کے ساتھ کنفیگر کردہ آلہ
● آلہ الٹراسونک نکالنے کے ماڈیول کے ساتھ ترتیب دیا گیا ہے۔
● آلہ مکمل طور پر خودکار کے ساتھ ترتیب دیا گیا ہے۔
● متغیر درجہ حرارت پروردن کے ساتھ ترتیب شدہ آلہ
● آلے کو مکمل طور پر بند ریجنٹ کٹ کے ساتھ ترتیب دیا گیا ہے۔

1. کیا نیوکلک ایسڈ کا پتہ لگانے والے ریجنٹس کو نکالنے اور صاف کرنے کی ضرورت ہے؟
نیوکلک ایسڈ کا پتہ لگانے کا اصول مندرجہ ذیل ہے: پرائمر کے عمل کے تحت، ڈی این اے پولیمریز ٹیمپلیٹ DNA/RNA (NA کی ریورس ٹرانسکرپشن کی ضرورت ہوتی ہے) پر چین ری ایکشن ایمپلیفیکیشن انجام دینے کے لیے استعمال کیا جاتا ہے، اور پھر جاری ہونے والے فلوروسینٹ سگنل کی مقدار کا تعین کرنے کے لیے پتہ لگایا جاتا ہے۔ آیا نمونے میں اس روگزن کا نیوکلیک ایسڈ (DNA/RNA) ہے جس کا پتہ لگایا جانا ہے۔

1) جو نمونے نکالے یا صاف نہیں کیے گئے ان میں بہت سے اجزاء شامل ہو سکتے ہیں جو حتمی نتیجہ کو متاثر کرتے ہیں: نیوکلیز (جو ہدف نیوکلک ایسڈ کو تحلیل کر سکتا ہے اور غلط منفی کا سبب بن سکتا ہے)، پروٹیز (جو ڈی این اے پولیمریز کو کم کر سکتا ہے اور غلط منفی کا سبب بن سکتا ہے)، بھاری دھات نمک (جو ترکیب کے غیر فعال ہونے کا باعث بنتا ہے اور غلط مثبت کا سبب بنتا ہے)، بہت تیزابی یا بہت زیادہ الکلائن پی ایچ (جو رد عمل کے ناکام ہونے کا سبب بن سکتا ہے)، نامکمل آر این اے (غلط منفی ریورس ٹرانسکرپشن کی ناکامی کا باعث بنتا ہے)۔

2)کچھ نمونوں کو براہ راست بڑھانا مشکل ہے: گرام پازیٹو اور کچھ پرجیوی، ان کی موٹی سیل کی دیواروں اور دیگر ڈھانچے کی وجہ سے، اگر وہ نیوکلک ایسڈ نکالنے اور پیوریفیکیشن کے عمل سے نہیں گزرتے ہیں، تو نکالنے سے پاک کٹ اس طرح کے لیے ناکام ہو سکتی ہے۔ نمونے

لہٰذا، یہ تجویز کیا جاتا ہے کہ ٹیسٹ کٹ یا نیوکلک ایسڈ نکالنے کے مرحلے کے ساتھ کنفیگر کردہ آلے کو منتخب کریں۔

2. کیمیائی نکالنا یا جسمانی الٹراسونک فریگمنٹیشن نکالنا؟
عام طور پر، کیمیکل نکالنے کا استعمال زیادہ تر علاج اور طہارت پر کیا جا سکتا ہے۔تاہم، موٹی دیواروں والے گرام پازیٹو بیکٹیریا اور کچھ پرجیویوں میں، ایسا بھی ہوتا ہے کہ کیمیکل نکالنے سے مؤثر نیوکلک ایسڈ ٹیمپلیٹس حاصل نہیں ہو پاتے، جس کے نتیجے میں غلط منفی کا پتہ چلتا ہے۔اس کے علاوہ، کیمیکل نکالنے میں اکثر مضبوط ایجنٹوں کا استعمال ہوتا ہے، اگر ایلیوشن مکمل نہیں ہے، تو رد عمل کے نظام میں مضبوط الکلی کو متعارف کرانا آسان ہے، جس کے نتیجے میں غلط نتائج برآمد ہوتے ہیں۔

الٹراسونک فریگمنٹیشن فزیکل کرشنگ کا استعمال کرتا ہے، جسے GeneXpert نے کامیابی کے ساتھ استعمال کیا ہے، جو کہ POCT کے میدان میں انسانی استعمال کے لیے ایک سرکردہ ادارہ ہے، اور کچھ پیچیدہ نمونوں (جیسے مائکوبیکٹیریم تپ دق) کے نیوکلک ایسڈ نکالنے میں اس کا مطلق فائدہ ہے۔

لہذا، یہ تجویز کیا جاتا ہے کہ ٹیسٹ کٹ یا نیوکلک ایسڈ نکالنے کے مرحلے کے ساتھ تشکیل شدہ آلہ منتخب کریں۔اور یہ بہترین ہے اگر الٹراسونک نکالنے کا ماڈیول موجود ہو۔

3. دستی، نیم خودکار اور مکمل طور پر خودکار؟
یہ مزدوری کی لاگت اور کام کی کارکردگی کا مسئلہ ہے۔فی الحال، پالتو جانوروں کے ہسپتالوں میں کافی عملہ نہیں ہے، اور نیوکلک ایسڈ نکالنا اور اس کا پتہ لگانا ایک ایسا کام ہے جس کے لیے کچھ مہارتوں اور تجربے کی ضرورت ہوتی ہے۔اس میں کوئی شک نہیں کہ مکمل طور پر خودکار نیوکلک ایسڈ نکالنے اور پتہ لگانے والی مشین بہترین انتخاب ہے۔

4. مستقل درجہ حرارت کی افزائش یا متغیر درجہ حرارت کی افزائش؟
امپلیفیکیشن ری ایکشن نیوکلک ایسڈ کا پتہ لگانے کا لنک ہے، اور اس لنک میں شامل پیشہ ورانہ ٹیکنالوجی پیچیدہ ہے۔موٹے طور پر، انزائمز کا استعمال نیوکلک ایسڈ کو بڑھانے کے لیے کیا جاتا ہے۔ایمپلیفیکیشن کے عمل میں، ایمپلیفائیڈ فلوروسینس سگنل یا ایمبیڈڈ فلوروسینس سگنل کا پتہ چلا ہے۔عام طور پر، فلوروسینس سگنل جتنا پہلے ظاہر ہوتا ہے، نمونے کے ہدف جین کا مواد اتنا ہی زیادہ ہوتا ہے۔

مستقل درجہ حرارت امپلیفیکیشن ایک مقررہ درجہ حرارت پر نیوکلک ایسڈ امپلیفیکیشن ہے، جب کہ متغیر درجہ حرارت امپلیفیکیشن سختی سے ڈینیچریشن-اینیلنگ- ایکسٹینشن کے مطابق ایک چکری امپلیفیکیشن ہے۔مسلسل درجہ حرارت کی افزائش کا وقت انجام دیا گیا ہے، جب کہ متغیر درجہ حرارت امپلیفیکیشن کا وقت درجہ حرارت میں اضافے اور آلہ کے گرنے کی شرح سے بہت زیادہ متاثر ہوتا ہے (اس وقت، بہت سے مینوفیکچررز تقریباً 30 منٹ میں 40 چکر لگانے میں کامیاب ہو چکے ہیں)۔

اگر لیبارٹری کے حالات اچھے ہیں اور زوننگ سخت ہے، تو یہ کہنا مناسب ہے کہ دونوں کے درمیان درستگی کا فرق بہت زیادہ نہیں ہوگا۔تاہم، متغیر درجہ حرارت کی افزائش نسبتاً کم وقت میں زیادہ نیوکلک ایسڈ مصنوعات کی ترکیب کرے گی۔سخت زوننگ اور پیشہ ورانہ تربیت کے عملے کے بغیر لیبارٹریوں کے لیے، نیوکلک ایسڈ ایروسول کے رساو کا خطرہ زیادہ ہوگا، لیکیج ہونے کے بعد جھوٹا مثبت ہوتا ہے، اور جسے ختم کرنا انتہائی مشکل ہے۔

اس کے علاوہ، مستقل درجہ حرارت امپلیفیکیشن غیر مخصوص امپلیفیکیشن کا بھی زیادہ خطرہ ہوتا ہے جب نمونہ پیچیدہ ہوتا ہے (متعلقہ رد عمل کا درجہ حرارت کم ہوتا ہے، اور ایکسٹینشن کا درجہ حرارت جتنا زیادہ ہوتا ہے، پرائمر بائنڈنگ کی خصوصیت اتنی ہی بہتر ہوتی ہے)۔

جہاں تک موجودہ ٹیکنالوجی کا تعلق ہے، متغیر درجہ حرارت کی افزائش زیادہ قابل اعتماد ہے۔

5. نیوکلک ایسڈ ایمپلیفیکیشن مصنوعات کے رساو کے خطرے سے کیسے بچیں؟
اس وقت، بہت سے مینوفیکچررز غدود کی قسم کی پی سی آر ٹیوب کو نیوکلک ایسڈ ری ایکشن ٹیوب کے طور پر منتخب کرتے ہیں، جو رگڑ کے ذریعے بند کردی جاتی ہے، اور متغیر درجہ حرارت پی سی آر ایمپلیفیکیشن میں متغیر درجہ حرارت کی کمی میں درجہ حرارت 90 ڈگری تک پہنچ جاتا ہے۔
سینٹی گریڈگرمی کے ساتھ توسیع کا بار بار عمل اور سردی کے ساتھ سکڑنا پی سی آر ٹیوب کو سیل کرنے کے لیے ایک بہت بڑا چیلنج ہے، اور غدود کی قسم پی سی آر ٹیوب میں رساو پیدا کرنا نسبتاً آسان ہے۔

رد عمل کی مصنوعات کے رساو سے بچنے کے لیے مکمل طور پر مہر بند کٹ/ٹیوب کے ساتھ ردعمل کو اپنانا بہتر ہے۔یہ بالکل درست ہوگا اگر نیوکلک ایسڈ نکالنے اور اس کا پتہ لگانے کے لیے مکمل طور پر مہر بند کٹ تیار کی جائے۔

لہذا نیو ٹیک کی نئی مکمل طور پر خودکار نیوکلک ایسڈ نکالنے اور پتہ لگانے والی مشین میں مندرجہ بالا پانچ بہترین انتخاب ہیں۔